酵母双杂交文库筛选

酵母双杂交文库筛选

相关应用 ：

蛋白的酵母双杂交实验是以酵母的遗传分析为基础，研究反式作用因子之间的相互作用对真核基因转录调控影响的实验。很早就已知道，转录活化蛋白可以和DNA 上特异的序列结合而启动相应基因的转录反应。这种DNA 结合与转录激活的功能是由转录活化蛋白上两个相互独立的结构域即DNA 结合结构域(BindingDomain, BD)和转录活化结构域(Activation Domain,AD)分别来完成的，并且这两个结构域对于基因的转录活化都是必须的。目前酵母双杂交实验采用的系统有LexA 系统和Gal4 系统两种。在LexA 系统中，DNA 结合结构域由一个完整的原核蛋白LexA 构成，转录活化结构域则由一个88 个氨基酸的酸性的大肠杆菌多肽B42 构成，它在酵母中可以活化基因的转录; 在Gal4 系统中，BD和AD 分别由Gal4 蛋白上不同的两个结构域(1-147aa 与768-881aa)构成。在利用GAL4 系统筛选cDNA 文库或研究蛋白间的相互作用时，DNA 结合结构域与靶蛋白即"诱饵"相结合，转录活化结构域与文库蛋白或要验证的蛋白相结合。

实验步骤：
1. CDNA文库质量检测

2 .诱饵载体的构建 

3 .诱饵质粒的自激活检测
4 .文库质粒和诱饵质粒转化酵母感受态细胞 

5 .文库筛选（mating或共转）
6 .文库筛选结果测序分析
7 .筛选结果回转验证(选做)
8.详细报告的整理和数据发送
9 .交付结果